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產(chǎn)品說(shuō)明：

產(chǎn)品描述：

Polybrene（聚凝胺，hexadimethrine bromide）是一種多聚陽(yáng)離子聚合物，常用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)以增強(qiáng)脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率。Polybrene目前廣泛用于逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染，慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染，作用機(jī)理可能是通過(guò)中和細(xì)胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥從而促進(jìn)吸附作用。Polybrene也是一種有名的抗肝素劑（肝素拮抗劑），常用來(lái)生產(chǎn)非特異性凝集的紅細(xì)胞。另外Polybrene也多用于蛋白測(cè)序，因?yàn)樾┝康腜olybrene在自動(dòng)測(cè)序分析可明顯改善多肽的降解現(xiàn)象。PVDF膜加入polybrene還能提高膜的親和性。

本產(chǎn)品以溶液形式提供，粉末用0.9% NaCl配制成10 mg/mL的溶液，并用0.22 μM濾膜過(guò)濾除菌。使用時(shí)一般按1:1000-1：2000稀釋，依細(xì)胞種類不同稀釋比例不同，具體查閱相關(guān)文獻(xiàn)。

操作步驟(僅供參考，具體使用濃度請(qǐng)參考相關(guān)文獻(xiàn))

注：Polybrene對(duì)某些細(xì)胞（如末端分化的神經(jīng)元，DC細(xì)胞）毒性較大，初次應(yīng)用建議先做毒性測(cè)試。

實(shí)驗(yàn)1：逆轉(zhuǎn)錄病毒感染（Retroviral Infection）
（1） 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒原液的制備：取5 mL生長(zhǎng)培養(yǎng)基（5%血清）加入含單層轉(zhuǎn)染逆轉(zhuǎn)錄包裝細(xì)胞的100 mm培養(yǎng)盤內(nèi)。孵育24 h后，吸去培養(yǎng)液并用0.45 μm濾器過(guò)濾。

（2）待感染細(xì)胞的培養(yǎng)：100 mm培養(yǎng)盤內(nèi)加入10 mL完全培養(yǎng)基，細(xì)胞密度為5×10⁵/盤。
（3）病毒感染：細(xì)胞培養(yǎng)24 h后，吸去完全培養(yǎng)液。用含polybrene的2 mL病毒上清 （或?qū)⒉《驹合♂尩? mL）感染細(xì)胞，polybrene的終濃度為5-10μg/mL。37°C孵育3-6 h。

（4）收集病毒顆粒：加入8 mL完全培養(yǎng)基。感染3天后，按照1:5的比例用選擇培養(yǎng)基裂解細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)2：轉(zhuǎn)染

（1）完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，培養(yǎng)細(xì)胞密度約50%；
（2）孵育細(xì)胞18-24 h后準(zhǔn)備DNA-培養(yǎng)基- Polybrene混合液，按如下操作制備混合液：①添加完全培養(yǎng)基（60 mm培養(yǎng)皿2 mL，100 mm培養(yǎng)皿3 mL），37°C預(yù)熱；②添加10 ng~10 μg質(zhì)粒輕輕混勻；③加入Polybrene至終濃度為5-10 μg/mL。輕輕混勻。以上每個(gè)成分需要按順序加入。
（3）去除培養(yǎng)基，在細(xì)胞中加入DNA-培養(yǎng)基-Polybrene溶液，在37°C孵育細(xì)胞6-20 h。細(xì)胞培養(yǎng)的前6 h內(nèi)約每1.5 h輕柔混勻。
（4）去除DNA-培養(yǎng)基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution（15%DMSO in 1×HBSS）輕輕蓋住細(xì)胞（60 mm培養(yǎng)皿3 mL，100 mm培養(yǎng)皿4 mL）。每次加入溶液時(shí)用手輕晃培養(yǎng)盤10 s，使得液體均勻分布。然后37°C孵育細(xì)胞4 min。
（5） 立即去除DMSO shock solution，用完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基輕輕清洗細(xì)胞2次。對(duì)于60 mm培養(yǎng)皿每次用5mL培養(yǎng)液清洗，100 mm培養(yǎng)皿每次用10 mL培養(yǎng)液清洗。

（6）加入完全培養(yǎng)基到細(xì)胞中；

（7）穩(wěn)定轉(zhuǎn)化：去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，按照1:5的比例用選擇培養(yǎng)基裂解細(xì)胞。

 瞬時(shí)表達(dá)：去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，加入新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。24-72 h后收獲細(xì)胞。

注意事項(xiàng)：

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并帶一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應(yīng)用或其他用途。