DNase I Solution (RNase & Protease-free) 脫氧核糖核酸酶I溶液（無RNase，蛋白酶）
產品描述
脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，在大多數細胞和組織中都能發現的一種核酸內切酶，偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵，產生5’端為磷酸基團、3’端為羥基的多聚核苷酸，平均消化產物最小為多聚四核苷酸。Mg2+存在條件下，DNase I可隨機識別和切斷DNA任一條鏈上的任意位點；而在Mn2+存在條件下，DNase I識別DNA的兩條鏈并在幾乎相同的位點進行切割。DNase I可水解多種形式DNA，如單鏈DNA、雙鏈DNA，甚至染色質（其切割速率受組蛋白影響）。
脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，最早從胰腺中分離而來，至今哺乳動物胰腺也是最主要的來源之一。DNase I以兩對二硫鍵結合的多種糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范圍是pH 7-8，DNase的活性依賴于Ca2+，并可被二價金屬離子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保護酶使其不被水解，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原來的1/2。
本品是即用型溶液形式的DNase I，不含RNase和蛋白酶，適用于各種RNA處理。另外還提供實驗所需的反應緩沖液和終止液，節省時間且用起來更方便。
產品應用
◇ 制備不含DNA的RNA樣本；
◇ RT-PCR反應前RNA樣本內基因組DNA等可能存在DNA污染的去除；
◇ T7，T3，SP6等RNA聚合酶催化的體外RNA轉錄后DNA模板的去除；
◇ DNase I足跡法（DNase I footprinting）研究DNA-蛋白質相互作用；
◇ 缺口平移法標記探針用；
◇ 制備隨機DNA片段文庫；
◇ TUNEL細胞凋亡檢測中用于剪切DNA制備陽性對照；
產品包裝
| 組分編號 | 組分名稱 |
貨號（規格） |
|
| X11413-200U | X11413-1000U | ||
| X11413-A | DNase I Solution (RNase & Protease-free) | 200U | 1000U |
| X11413-B | 10×Reaction Buffer | 200μl | 1ml |
| X11413-C | 10×Stop Solution | 200μl | 1ml |
保存與運輸方法
保存：-20℃凍存，1年穩定。
運輸：冰袋運輸。
注意事項
1） 本DNase I的儲存緩沖液為50mM Tris-acetate(pH 7.5)，10mM CaCl2，50%(v/v) glycerol。如需對其進行稀釋，則使用本儲存緩沖液進行稀釋。
2） 酶的使用過程中需放在冰盒或冰浴內，使用結束立即放回-20℃保存。
3） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、RT-PCR反應前RNA樣本內DNA污染的去除
1.1 DNA模板經核酸內切酶線性化，用酚/氯仿和氯仿/異丙醇提取DNA，用乙醇沉淀后，溶于適量無菌去離子水中。
1.2 往一個RNase-free EP管內依次加入下列試劑：
| RNA樣本 | 1μg |
| 10×Reaction Buffer | 1μl |
| 用DEPC-treated Water補充 | 至9μl |
| DNase I (1U/μl) | 1μl |
【注意】：如果需要處理較大量的RNA樣品，可按比例放大上述反應體系。條件許可下最好往體系內加入適量RNase抑制劑（貨號：MF0218-2KU）以防止RNA降解。
1.3 37℃孵育30min。
1.4 往上述體系內加入1μl 10× Stop Solution使其終濃度為1×，混勻。之后65℃孵育10min使DNase I失活。【注意】：一定要先加入10× Stop Solution，然后再加熱失活RNase I，否則先加熱可能引起RNA被降解。
1.5 加熱處理后的RNA樣品即可直接用作RT-PCR反應用的模板。
二、體外RNA反轉錄后模板DNA的去除
2.1 每個含有0.5μg模板DNA的反轉錄體系中加入1U DNase I，某些情況下模板DNA完全消化所需的DNase I需通過實驗來摸索。
2.2 37℃孵育15min。
2.3 酚/氯仿抽提失活DNase I。
三、其他用途請參考上述方法或參考文獻等進行。
