EDC HCl (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride) 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽
EDC·HCl（1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽）是實驗室常用的水溶性碳二亞胺類縮合劑與交聯劑，專用于酰胺鍵合成、生物分子偶聯，是肽合成、蛋白修飾、免疫原制備的核心試劑。
一、產品基本信息
1. 基礎參數
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參數項
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詳情
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中文名稱
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1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC鹽酸鹽）
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英文名稱
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1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride（EDC·HCl）
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CAS 號
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25952-53-8
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分子式/分子量
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C8H17N3·HCl；191.70
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外觀
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白色結晶粉末，極易吸潮
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純度
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99%
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熔點
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116 ℃
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溶解性
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水中溶解度＞20 g/100 mL，易溶于乙醇；微溶于有機溶劑
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儲存
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2–8 ℃密封避光，防潮；建議-20 ℃長期保存
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2. 核心特性與用途
反應機制：先與羧基形成不穩定的O-酰基異脲中間體，再與伯胺反應生成酰胺鍵；中間體易水解，需用NHS/Sulfo-NHS穩定以提升效率、減少副反應。
主要應用：
- 肽/酰胺合成：羧酸與胺縮合構建酰胺鍵；
- 生物偶聯：蛋白-肽、半抗原-載體蛋白（如BSA/OVA/KLH）、羧基微球-抗體交聯；
- 材料修飾：活化羧基表面用于生物分子固定；
- 磷酸酯活化：用于磷酸基團的修飾與連接。
二、標準使用流程（分場景）
1. 通用實驗原則
- pH 控制：活化階段（羧基→活性酯）推薦pH 4.5–6.0（常用0.1 M MES緩沖）；偶聯階段（與胺反應）推薦pH 7.0–8.5（常用PBS緩沖）。
- 現配現用：EDC·HCl在水溶液中半衰期短，必須臨用前新鮮配制，建議用預冷超純水或MES溶解。
- 摩爾比：EDC通常為羧基底物的5–20 倍摩爾當量；NHS/Sulfo-NHS與EDC等摩爾或略過量。
2. 場景A：半抗原-載體蛋白偶聯（免疫原制備）
試劑準備：載體蛋白（BSA/OVA/KLH）2 mg；半抗原/肽1–2 mg；0.1 M MES緩沖液（pH 4.5–5.0）；EDC·HCl 10 mg。
操作步驟：
1. EDC·HCl回溫至室溫，用預冷超純水配成10 mg/mL溶液；
2. 載體蛋白2 mg溶于200 μL MES緩沖；半抗原/肽1–2 mg溶于500 μL MES緩沖，合并混勻；
3. 加入EDC溶液（BSA/OVA加100 μL；KLH加50 μL），立即輕柔混勻；
4. 室溫反應1–2 h（出現沉淀則減少EDC用量）；
5. 用脫鹽柱/超濾純化偶聯物，4 ℃短期保存，-20 ℃長期保存。
3. 場景B：肽/酰胺合成（溶液相）
試劑配比：N-保護氨基酸（1.0 eq）、C-保護胺鹽（1.0 eq）、EDC·HCl（1.2 eq）、HOBt（1.2 eq）、DIPEA（1.0 eq，中和胺鹽）。
操作步驟：
1. 底物溶于無水DMF/DCM，0 ℃冷卻；
2. 加HOBt與EDC·HCl預活化羧基10 min；
3. 滴加胺與DIPEA的DMF溶液，0 ℃反應1–2 h后轉室溫繼續反應；
4. TLC監測終點，水洗除去脲副產物，純化得產物。
4. 場景C：羧基微球-抗體偶聯
1. 微球（含-COOH）用MES緩沖（pH 4.5–5.0）重懸，加入Sulfo-NHS與EDC·HCl（摩爾比1:1.2），室溫活化15–30 min；
2. 離心洗滌除去過量試劑，重懸于PBS（pH 7.2–8.0）；
3. 加入抗體溶液，室溫偶聯1–2 h或4 ℃過夜；
4. 加1 M Tris-HCl（pH 8.5）淬滅未反應活性位點，封閉洗滌后保存。
三、關鍵注意事項與常見問題
1. 禁忌與安全
- 避免使用含胺/羧基的緩沖液（如Tris、甘氨酸），會與EDC競爭反應降低效率；
- 操作需戴手套、護目鏡，在通風櫥進行；避免吸入粉塵，不慎接觸皮膚/眼睛立即用大量清水沖洗。
2. 常見問題與解決
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問題
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可能原因
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解決方案
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偶聯產率低
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EDC水解/活化不足、pH不當
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現配EDC；活化pH 4.5–5.0，偶聯pH 7.0–8.5；補加NHS穩定中間體
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背景雜/非特異性結合
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反應時間過長、EDC過量
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縮短反應時間；降低EDC當量；使用Sulfo-NHS減少副反應
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蛋白沉淀
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EDC濃度過高、局部pH波動
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降低EDC用量；分步加入EDC；控制反應體系濃度
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產物不純
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副產物未除凈
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用脫鹽柱/超濾/透析純化；反應后充分洗滌
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四、配方與試劑搭配（高效組合）
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組合
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適用場景
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優勢
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EDC/NHS
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蛋白/肽偶聯、酰胺合成
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穩定活性酯，提升產率，減少N-酰基脲副產物
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EDC/Sulfo-NHS
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水相偶聯、微球修飾
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Sulfo-NHS水溶性好，操作更便捷，適合生物大分子
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EDC/HOBt
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難耦合肽段、位阻較大底物
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抑制外消旋化，提高產物純度
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